|
|
Вопрос:
В соответствии с пунктом 3.1 приказа МЗ РФ 322 от 21
октября 2002 года с первого января 04 года запрещается
использование в качестве подтверждающих для выявления
анти-HCV антител тест-систем содержащих не полный спектр
структурных и неструктурных белков. В связи с этим вопрос.
Соответствуют ли на момент вступле-ния в действие данного
требования все тест-системы, приведенные в приложении
4 к приказу (помимо приведенной под номером 6/2)?
Какие именно вирусные белки со-ставляют полный спектр
и чье присутствие в тест-системе обязательно?
Кроме того, в литературе имеются сведения о значении для
ранней диагностики гепатита С выявления антител относящихся
к IgM. При остром течении заболевания антитела класса
М появ-ляются на 2-3 недели раньше, чем антитела класса
G. Ряд про-изводителей диагностических систем предлагают
тест-системы, ориентированные на выявление именно антител
класса М (к примеру, РекомбиБест анти-ВГС - IgM - стрип
). Для выявления антител, какого класса предназначены
подтверждающие тест-системы?
Ответ
Отвечаю на Ваши вопросы, несколько изменив их порядок
1. Какие именно вирусные белки составляют полный
спектр и чье присутствие в тест-системе обязательно?
Геном гепатита С кодирует информацию о полипептиде,
состоящем из структурных и неструктурных белков.
Структурные белки - это CORE или CAPSID (ядерные белки),
Е1 и Е2 (или > E2/NS1) - оболочечные белки вируса.
Неструктурные белки - NS2, NS3, NS4, NS5 (кодируют хеликазу,
протеазу, репликазу и РНК-полимеразу), т.е. белки не входящие
в структуру вируса.
Разные участки генома обладают разной вариабельностью.
Для тест-систем используют белки, кодируемые наиболее
КОНСЕРВАТИВНЫМИ (не вариабельными) участками, Обязательные
белки : это CORE, > NS3, NS4, эти белки есть у всех
производителей, у многих производителей есть белок, кодированный
зоной NS5.
2. В соответствии
с пунктом 3.1 приказа МЗ РФ ? 322 от 21 октября 2002 года
первого января 2004 года запрещается использование в качестве
подтверждающих для выявления анти-HCV антител тест-систем,
содержащих неполный спектр структурных и неструктурных
белков. В связи с этим вопрос. Соответствуют ли на момент
вступления в действие данного требования все тест-системы,
приведенные в приложении 4 к приказу (помимо приведенной
под номером 6/2)?
Прежде, чем отвечать, на данный вопрос, мне хотелось
бы напомнить, что история создания диагностических препаратов
развивалась от создания тест-систем первого поколения
(с наличием белков, кодированных зонами NS3 и NS4) к второму
поколению (дополнительно к уже имеющимся белкам был добавлен
белок, кодированный Сore- зоной РНК ВГС) и к третьему
поколению, в состав которого был добавлен белок информация
о котором лежит в зоне NS5). По этому же пути шли и развивались
подтверждающие тесты. При понимании данной ситуации необходимо
помнить, что главными характеристиками использованных
наборов для детекции антител является их чувствительность,
специфичность и уровень выявляемости антител в той или
иной популяции. Кроме того, существует правило для подтверждения
специфичности полученного результата: применять тесты
фирмы аналогичной с диагностикумом, примененным при скрининговом
исследовании.
На наш взгляд, возникшая дискуссия, прежде всего, связана
с диагностическим препаратом для выявления анти-ВГС фирмы
<Био-рад> (Франция), в котором не используется белок,
кодированный зоной NS5, который присутствует во многих
отечественных и зарубежных тест-системах. Многочисленные
исследования, посвященные этому вопросу (прежде всего,
научная группа <БИО-Рад> и <Санофи Диагностикс
Пастер>), продемонстрировали, что этот белок не является
столь обязательным для применения в диагностикумах. Это
мнение основывалось на утверждении, что зона NS5 кодирует
РНК-репликазу, а она есть у многих других РНК-содержащих
вирусов и плюс является одним из наиболее вариабельных
участков. По их мнению, наличие этого белка не дает преимуществ
по чувствительности, а лишь увеличивает кол-во ложноположительных
результатов.
Кроме того, по данным литературы (и по нашим собственным
наблюдениям) образцы с наличием изолированных антител
к белкам, кодированным зоной NS5, у лиц, инфицированных
ВГС, не удается выявить. Показано, что значительное количество
ложно-положительных результатов происходит из-за изолированной
активности anti-NS5.
Считается, что высокое качество диагностических наборов
прежде всего, определяется качеством подбора белков, кодированных
CORE, NS3, NS4.
Подтверждением этого является и информация о том, что
ученые такой уважаемой фирмы <Аввотт> при разработке
нового теста для выявления анти-ВГС на приборе <Архитекте>
отказались от использования белка, кодированного зоной
РНК NS5.
В заключении моего ответа на поставленный вопрос, я хочу
подчеркнуть, что я ни в коем случае не призываю к возвращению
к диагностикумам <второго поколения>. Еще раз считаю
важным повторить, что критериями возможности применения
диагностических препаратов, прежде всего, является чувствительность,
специфичность и выявляемость анти-ВГС.
3. Кроме того, в литературе имеются сведения о
значении для ранней диагностики гепатита С выявления антител,
относящихся к IgM. При остром течении заболевания антитела
класса М появляются на 2-3 недели раньше, чем антитела
класса G. Ряд производителей диагностических систем предлагают
тест-системы, ориентированные на выявление именно антител
класса М (к примеру, РекомбиБест анти-ВГС-IgM-стрип ).
Для выявления антител какого класса предназначены подтверждающие
тест-системы?
Подтверждающие, как и скриннинговые тесты выявляют
антитела класса G. Проведенные исследования продемонстрировали,
что тест, предназначенный для выявления анти-ВГС класса
IgM, может быть использован у некоторых больных для контроля
за эффективностью лечения. Применение этого теста для
диагностики острого гепатита С пока не нашло своего места.
Это, прежде всего, связанно с тем, что применение ПЦР
анализа для выявления РНК ВГС позволяет выявить инфицированных
больных в более ранние сроки. Кроме того, не у всех лиц,
инфицированных ранее ВГС, удается обнаружить анти-ВГС
класса IgM.
Вопрос о возможности применения теста для выявления антител
к вирусу гепатита С класса М, по прежнему, остается вопросом
научного исследования. В службе переливания крови, этот
тест для отбраковки доноров не применяется.
С уважением и наилучшими пожеланиями,
Руководитель лаборатории
индикации НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи
РАМН, Руководитель отдела вирусных гепатитов НИИ полиомиелита
и вирусных энцефалитов им. М.П.Чумакова РАМН,
Доктор мед.наук, проф.
М.И.Михайлов
На главную
|
|